Programa del curso teórico:

Estructura y conformación de los ácidos nucleicos.
Generalidades de las interacciones ADN-proteínas.
Regulación de la transcripción en procariotas.
Regulación post transcripcional en procariotas.
Expresión génica en eucariotas.
Modelos de regulación génica en eucariotas.
Síntesis de proteínas.
Localización y tráfico de proteínas.
Replicación del ADN.
Recombinación del ADN.
Reparación del ADN.
Cromatina, estructura y función.
Cromatina durante la transcripción y replicación.
Transducción de señales.
Bases moleculares del desarrollo.
Organización del genoma.
ARN autocatalítico. Retrovirus y retroposones.
Priones.
Biología molecular vegetal.
Radicales libres y transcripción.

Programa del curso práctico:

Discusión: Técnicas de Biología Molecular.

MÓDULO 1. Purificación y análisis de ácidos nucleicos.
Discusión: Extracción y purificación de ácidos nucleicos.
Práctico: Extracción de ADN genómico. Homogenización, proteinasa K, SDS, EDTA precipitación.
Discusión: Purificación de ADN.
Práctico: Purificación de ADN. Tratamiento con ARNasa y/o LiCl.
Práctico: Análisis de ADN espectrofotométrico y electroforético.
Discusión: Estructura y conformación de ácidos nucleicos.
Artículo para discusión: "Helical repair of DNA in solution". Wang, J.C. (1979). Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, 200-203.
Práctico: Topoisomerasas. Análisis de geles de electroforesis de ADN plasmídico tratado con topoisomerasas.
Informe sobre el trabajo experimental del módulo 1.

MÓDULO 2. Amplificación por PCR.
Práctico: Amplificación por PCR.
Artículo para discusión: "Represión and activation of transcription by Gal and Lac repressors: involvement of alpha subunit of RNA polymerase". Choy, H.E. et al. (1995). EMBO J 14, 4523-4529.
Práctico de Amplificación por PRC. Preparación de reacciones y programación de ciclos de amplificación.
Práctico de análisis de los productos de PCR y aislamiento de amplificación. Gel de electroforesis y lana de vidrio.
Informe de trabajo experimental de módulo 2.

MÓDULO 3. Clonación y selección de moléculas recombinantes.
Discusión sobre Transformación. Vectores, ligación, células huésped.
Artículo de discusión: "Transcriptional activation and DNA binding by the erythroid factor GF-1/NF-E1/Eryf1". Martín, D.I.K. & Orkin, S.H. (1990). Genes and Development 4, 1886-1898.
Práctico de Transformación. Plaqueo.
Discusión sobre selección de Transformantes. Eficiencia.
Práctico: Selección de Transformantes. Eficiencia. Precultivo.
Práctico: Minipreparación de ADN plasmídico y Digestión con enzimas de restricción.
Práctico: Gel electroforesis, determinación de tamaño y mapa de restricción.
Informe módulo 3.

MÓDULO 4. Técnicas de hibridación y secuenciación de ácidos nucleicos.
Discusión: Técnicas de hibridización. Marcado de sondas. Condiciones de rigurosidad. Temperatura. Fuerza iónica. Detergentes. Rastreo por hibridización. Rastreo inmunológico. Anticuerpos monoclonales y policlonales. Segundos anticuerpos. Detección.
Artículo para discutir: "Copurification of E.coli RNAase E and PNPase: evidence for specific association between two enzymes important in RNA. Processing and degradation". Carpousis, A.J. et al. (1994). Cell 76, 889-900.
Práctico: Revelado. Análisis de resultados.
Discusión sobre secuenciación.
Práctico: secuenciación.
Informe práctico sobre módulo 4.

MÓDULO 5. Informática aplicada a la Biología Molecular.
Práctico: Análisis de genomas y cromosomas completamente secuenciados.
Informe de trabajo experimental.

Discusión sobre Técnicas de Biología Molecular. Estrategias y Técnicas de uso corriente. Recapitulación.
Artículo para discutir: "Comparison of the sequences of the Aspergilus nidulans hxB and Drosophila melanogasterrna-1 genes with nifS from Azobacter vinelandii suggests a mechanism for the insertion of the terminal sulphur atom in the molybdopterin cofactor". Amarini, L. et al. (2000). Molec. Microbiol. 38, 1154-1250.

Carga horaria:

2 clases semanales de teórico de 2 horas de duración.
1 clase de práctico de 4 horas por semana.

Docentes encargados de curso:
Lisette Gorfinkiel (Profesor Adjunto, Grado 3).

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